Hé! Mint az FMOC - AIB - OH TFA szállítója, mélyen belemerültem a fordított fáziskromatográfia világába tisztításuk érdekében. Fordított - fáziskromatográfia egy Go - módszer a tisztítási folyamatban, de a megfelelő megszerzése kissé kihívást jelenthet. Ebben a blogban megosztom néhány tippet a folyamat optimalizálására.
Először is, értjük meg az alapokat. A fordított fáziskromatográfia hidrofób képességük alapján elválasztja a vegyületeket. Az FMOC - ő - AIB - OH TFA esetében azt akarjuk, hogy hatékonyan elkülönítsük más szennyeződésektől. A fordított fáziskromatográfiás helyhez kötött fázisa általában hidrofób, mint egy C18 oszlop, és a mozgó fázis olyan poláris oldószerek, például víz és szerves oldószerek, például acetonitril vagy metanol keveréke.
A jobb oszlop kiválasztása
Az oszlop megválasztása elengedhetetlen. Az FMOC számára - AIB - OH TFA, a magas minőségű C18 oszlop gyakran nagyszerű lehetőség. Az oszlop hossza és átmérője is. Egy hosszabb oszlop jobb elválasztást biztosíthat, de növelheti az elemzési időt. A rövidebb oszlop viszont felgyorsíthatja a folyamatot, de feláldozhat valamilyen felbontást.
Amikor először kezdtem az FMOC - AIB - OH TFA tisztításával, kísérleteztem különböző C18 oszlopokkal. Egyes oszlopok magasabb szén -dioxid -terhelést jelentettek, ami azt jelentette, hogy hidrofób voltak. Ez nagyszerű volt a hidrofób szennyeződések megtartására, de vigyáznom kellett, hogy ne kerüljön túl - megtartsa az FMOC -t - az AIB - Oh TFA -t.
Egy másik dolog, amelyet figyelembe kell venni, az oszlopcsomagolás részecskemérete. A kisebb részecskeméretek általában jobb felbontást kínálnak, de növelhetik a rendszer hátrányát is. Tehát meg kell találnia az egyenleget a kromatográfiás rendszer képességein alapuló egyensúlyt.
A mobil fázis optimalizálása
A mobil fázis olyan, mint a "hordozó", amely a vegyületet az oszlopon keresztül mozgatja. A víz és a szerves oldószer aránya kulcsfontosságú tényező. Az FMOC - HI - AIB - OH TFA esetében gyakran egy gradiens elúciót használnak. Ez azt jelenti, hogy a víz nagyobb százalékával kezdve és fokozatosan növeli a szerves oldószer százalékát.
Általában egy olyan mozgó fázissal kezdem, amely körülbelül 90% víz és 10% acetonitril. Ez lehetővé teszi, hogy a polárosabb szennyeződések először eluálódjanak. Ahogy növelem az acetonitril százalékát, az FMOC - AIB - OH TFA elkezdi mozogni az oszlopon. Fontos az a sebesség, amellyel növelem a szerves oldószer százalékát. Ha túl gyorsan növelem, akkor az elválasztás nem elég jó, és az FMOC - az ő - AIB - ó, a TFA bizonyos szennyeződésekkel járhat. Ha túl lassan növelem, az elemzési idő nagyon hosszú lesz.
A mobil fázis pH -ja is szerepet játszik. FMOC - HI - AIB - OH TFA savas és alapvető funkcionális csoportokkal rendelkezik, így a pH beállítása megváltoztathatja töltését és hidrofób képességét. Gyakran használok egy puffert, például foszfátpuffert a pH szabályozására. A 2 - 3 körüli pH -k általában jó kiindulási pont, mivel elősegítheti az alapcsoportok protonálását, és a vegyület hidrofóbébbé tétele.
Hőmérsékleti szabályozás
A hőmérséklet befolyásolhatja az elválasztást a fordított fáziskromatográfiában. Általánosságban a hőmérséklet növekedése csökkentheti a mobil fázis viszkozitását, ami gyorsabb eluálási időkhöz vezethet. Ugyanakkor megváltoztathatja a vegyületek visszatartási viselkedését is.
Az FMOC - ő - AIB - OH TFA számára, azt tapasztaltam, hogy a 25–30 ° C körüli hőmérséklet jól működik. Ezen a hőmérsékleten az elválasztás jó, és az elemzési idő ésszerű. Ha a hőmérséklet túl magas, akkor a vegyület romlik, és ha túl alacsony, akkor az elválasztás nem lehet olyan hatékony.
Minta előkészítés
A minta megfelelő előkészítése elengedhetetlen. Mindig feltétlenül oldom fel az FMOC -t - a - AIB - OH TFA mintát egy megfelelő oldószerben. A víz és a mobil fázisban használt szerves oldószer keveréke gyakran jó választás. Ez elősegíti annak biztosítását, hogy a minta kompatibilis legyen a mobil fázissal, és simán beilleszthető a kromatográfiás rendszerbe.
A mintát az injekció előtt is szűrem a részecskék eltávolításához. Ez megakadályozhatja az oszlop eltömődését és a kromatográfiás rendszer védelmét. A 0,22 - a mikronszűrő általában elegendő erre a célra.
Megfigyelés és validálás
A tisztítási folyamat során fontos a kromatogram figyelemmel kísérése. UV -érzékelőt használok a vegyületek elúciójának nyomon követésére. Az FMOC - AIB - OH TFA -nak van egy jellegzetes UV -abszorpciós csúcsa, amely lehetővé teszi számomra, hogy nyomon kövessék az oszlopon keresztüli előrehaladását.
A tisztítás után validálom az eredményeket. Olyan technikákat alkalmazok, mint a tömegspektrometria, hogy megerősítsem a tisztított FMOC - HIS - AIB - OH TFA és nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát (HPLC), hogy ellenőrizze annak tisztaságát. Ha a tisztaság nem felel meg a jelnek, visszamegyek és beállítom a kromatográfiás paramétereket.
Kapcsolódó vegyületek és linkek
Mellesleg, ha érdekli a kapcsolódó vegyületek, nézd megOktadecanedioic sav monó - terc - butil -észter,Tbuo - he - gal (aoe - aoe) - otbue, ésFmoc - thr (tbu) - phe - oh- Ezek a vegyületek szintén fontosak a gyógyszeriparban, és relevánsak lehetnek a kutatás vagy termelés szempontjából.
Következtetés
A fordított fáziskromatográfia optimalizálása az FMOC - AIB - OH - TFA tisztításához, egy olyan folyamat, amely türelmet és kísérletet igényel. Az oszlop gondos kiválasztásával, a mozgófázis optimalizálásával, a hőmérséklet szabályozásával, a minta megfelelő előkészítésével, valamint az eredmények megfigyelésével és validálásával, magas minőségű tisztítást érhet el.
Ha az FMOC - az AIB - OH TFA - piacán van, vagy bármilyen kérdése van a tisztítási folyamatról, ne habozzon felkeresni a beszerzési vitát. Azért vagyunk itt, hogy segítsünk abban, hogy a lehető legjobb minőségű terméket kapja meg az Ön igényeihez.
Referenciák
- Snyder, LR, Kirkland, JJ és Glajch, JL (2010). Gyakorlati HPLC módszerfejlesztés. John Wiley & Sons.
- McMaster, MC (2006). HPLC a gyógyszertudósok számára. Wiley - Interscience.